专题五 ＤＮＡ和蛋白质技术

课题一　ＤＮＡ的粗提取与鉴定

1.提取DNA的溶解性原理包括

DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精，但细胞中蛋白质可溶于酒精。

在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度（2mol/L）可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。

1.       利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理：①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影

②洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。

③温度值为60～80℃，蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。

3.鉴定DNA：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。

4.实验材料的选取

本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破.

5.实验操作

制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心

↓

破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌

↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。

溶解核内DNA………… 加入NaCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌

↓

DNA析出……………… 加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L溶液中

↓→除去细胞质中的大部分物质。

DNA初步纯化………… 与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物

↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。

DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色

6.注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；二苯胺试剂要现用现配等。